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DNA鑒定之DNA分離的必要性
http://m.pnjssss.com.cn/      2013-07-26 10:49       來源:上海親子鑒定中心法醫(yī)物證司法鑒定所
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PCR擴增STR等位基因的產物中包含著許多DNA分子,怎樣分離這些產物是具有挑戰(zhàn)性的問題。一個復合擴增PCR反應可以產生20個或更多的DNA片段,而這些片段必須要能彼此準確地區(qū)分,包括那些僅有一個堿基差異的等位基因(例如THO1基因座上的等位基因9.3和10)。通常分離單堿基差異的DNA片段長度均在100至400bp之間。這些分離方法必須能使結果重現(xiàn),并可在不同實驗室間進行比對,這是非常重要的。
為了區(qū)分不同的分子,需要一種能分離不同長度片段的技術。常用的分離方法即電泳,包括平板電泳和毛細管電泳。
對于短串連重復DNA的PCR產物,其分離方法必須能區(qū)分每一個等位基因。雜合性等位基因可以通過電泳分離不同長度的片段,倒如,平板電泳或毛細管電泳。
電泳( electrophoresis) -詞來源于希臘語electron和拉丁語phore,因為電泳的過程依賴于分子所攜帶的電荷。對于DNA而言,其磷酸根基團帶有負電荷,而核酸之所以呈酸性也是因這些磷酸根基團很容易釋放出氫離子,使核酸在絕大多數(shù)緩沖液中帶有負電荷。在電場作用下,DNA分子將離開陰極向陽極泳動。電壓越高,DNA分子所受的電場力就越大,移動速度也就越快。
離子在電場中的移動會產生熱量,這些熱量必須要散發(fā)掉,否則會被系統(tǒng)吸收。過量的熱會使凝膠產生弧形的電泳譜帶,在一些特殊的情況中?凝膠也會融化和斷裂。正如本章結尾部分所討論,毛細管電泳之所以具有很強的優(yōu)越性,因為毛細管具有較高的表面積與體積之比使散熱更為容易。

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